Новый протокол Маурицио Чеккарелли: Использование стволовых мезенхимальных клеток в формировании молодых фибробластов

Мы знаем что стволовые клетки это недифференцированные (незрелые) клетки, имеющиеся у многих видов многоклеточных организмов. Они способны самообновляться, образуя новые стволовые клетки, делиться посредством митоза, дифференцироваться в специализированные клетки и превращаться в клетки различных органов и тканей.

Развитие многоклеточных организмов начинается с одной стволовой клетки, которую принято называть зиготой. В результате многочисленных циклов деления и процесса дифференцировки образуются все виды клеток, в случае человеческого организма таких видов клеток более 220. Стволовые клетки сохраняются и функционируют и во взрослом организме. Благодаря им может осуществляться обновление и восстановление тканей и органов. Это в теории открывает безграничные возможности по выращиванию донорских органов и лечении многих болезней.

Сегодня мы знаем, что во всех тканях находятся стволовые клетки в фазе покоя (сна) готовые в любой момент дифференцироваться в новые зрелые клетки. Они представляют собой один из возможных способов восстановления биологических повреждений.

Стволовые клетки способны к асимметричному делению, при котором одна из дочерних клеток остается стволовой, а другая дает начало специализированным клеткам того или иного типа. Так же стволовые клетки при введении их в организм способны находить зону повреждения и фиксироваться там, исполняя утраченную функцию. 
В современной медицине стволовые клетки человека уже используют при лечении лейкозов и лимфом. А в эстетической медицине они нашли применение для таких проблем как возрастные изменения кожи лица второй или третьей степени и аллопеции.

Существует несколько типов стволовых клеток: эмбриональные, фетальные, постнатальные, гемопоэтические и мезенхимальные. По техническим причинам некоторые из них мы не можем использовать, но мезенхимальные стволовые клетки применяются с успехом.

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), это клетки способные дифференцироваться в остеобласты (клетки костной ткани), хондроциты (хрящевые клетки), адипоциты (жировые клетки) а так же что нас более интересует - новые фибробласты кожи.

Основным источником ММСК является костный мозг, но процедура для получения стволовых клеток таким путём является слишком инвазивной и трудной. Так же ММСК были обнаружены в жировой и других тканях с хорошим кровообращением. Жировая ткань является более легкодоступным биологическим материалом по сравнению с костным мозгом и МСК, полученные из жировой ткани, лучше подходят для использования в эстетической медицине. Для получения стволовых мезенхимальных клеток из жировой ткани их отделяют механически и ферментативно от соединительной ткани в которой они находятся, промывают и освобождают от токсинов; после чего они вновь вводятся, но на этот раз в дерму. Весь процесс имеет свои особенности и сложности, такие как обязательное выполнение манипуляций в специальном защищённом помещении с соблюдением режима максимальной стерильности. Все эти ньюансы значительно затрудняют работу.

К счастью, последние открытия на базе стволовых клеток подготовили почву для пересмотра устаревших протоколов о регенерации кожи. И мы, уже сегодня, можем использовать и активировать мезенхимальные стволовые клетки без инвазивного вмешательства благодаря новым открытиям и на их базе созданного протокола профессора Маурицио Чеккарели: «Использование стволовых мезенхимальных клеток в формировании молодых фибробластов»

В соответствии с протоколом разработанным профессором Виктором Гарсия в 2001 году в Испании, процесс регенерации кожи проводится применяя факторы роста высвобождаемые после дегрануляции тромбоцитов. Протокол предполагает использование аутологичных (собственных) тромбоцитов путём введения их в кожу пациента. Из тромбоцитов выделяются различные факторы роста, которые которые действуя на фибробласты стимулируют обновление и регенерацию дермы.

Факторы роста воздействуют на уровне рецепторов фибробласта тирозин-киназу, активируя процессы пролиферации и метаболизма. Как следствие, происходит регенерация матрикса кожи с формированием ретикулярного коллагена и реальное омоложение кожи. Мы знаем, что высокая концентрация ретикулярного коллагена характерна для молодой кожи.

Но длительный период использования данного протокола и клинические наблюдения за пациентами поставили нас перед следующим вопросом: почему мы наблюдаем значительные различия в результатах при использовании факторов роста тромбоцитов у молодых пациентов и у пациентов старшего возраста?

Углубимся в эти различия для лучшего понимания биологических механизмов данного процесса: фибробласт меняет потенциал своих метаболических процессов в зависимости от своего возраста. Молодой фибробласт производит в основном протеогликаны, эластин и ретикулярный коллаген, в то время как постаревший фибробласт производит коллаген первого типа. Кроме того, старея, у фибробласта уменьшается количество поверхностных рецепторов и как следствие, ухудшается ответ на стимуляцию. Эти исследования позволили нам понять и объяснить различие клинических ответов в зависимости от возраста пациента и биологического состояния их фибробластов. К этому добавим, что увеличение производства фиброзного коллагена( I-го типа) по отношению к ретикулярному (III-й тип), определяет процесс старения.

Кроме того, мы знаем, что все клетки имеют определённое количество митозов (Предел Хейфлика), достигнув который - отмирают. Хотя есть три типа клеток: стволовые, половые и опухолевые, в которых есть теломеразная активность - концы их хромосом надстраиваются, то есть эти клетки способны проходить потенциально бесконечное количество клеточных делений, они в теории могут быть бессмертны. Это опять отсылает нас к теоретически бесконечным возможностям использования стволовых клеток.

Но вернёмся к теме фибробластов: многократное стимулирование фибробластов (претерпевших уже большое количество митозов) у пожилых людей ускоряет гибель этих клеток. Из всего этого мы сделали следующие выводы: необходимо получить новые, молодые фибробласты, которые смогут продуцировать полноценный матрикс кожи и, являясь молодыми, не будут подвержены скорой гибели. Это может быть достигнуто путем введения стволовых мезенхимальных клеток, способных дифференцироваться в новые молодые фибробласты.

Как мы уже обсудили в предыдущей части, жировая ткань является более легкодоступным биологическим материалом по получению ММКС (мультпотентные мезенхимальные стромальные клетки), но для проведения процедуры необходимы максимально стерильные условия. Это сложно с технической стороны и значительно увеличивает затраты.

Наличие "спящих" стволовых клеток в практически каждых тканях - давно всем известный научный факт. Наша научная группа изучила все возможные факторы влияющие на самоактивацию и дифференциацию стволовых клеток.

Из литературных источников известно, что низкая концентрация свободных радикалов кислорода (между 0,1 и 0,5 ммоль) активирует процесс дифференциации стволовых клеток. Свободные радикалы являются клеточными медиаторами и в малых дозах блокируются антиоксидантами. В средних дозах активируют процесс дифференциации клеток, а в высоких дозах взывают апоптоз.

После многочисленных экспериментов и расчётов, была разработана специальная техника по высвобождению свободных радикалов кислорода с использованием точно дозированного витамина С в концентрации измеряемой в Ммоль, оптимальной, безопасной и необходимой для процесса дифференциации стволовых клеток. Мы знаем, что аскорбиновая кислота в присутствии железа, активирует реакцию Фентона, с освобождением свободных радикалов. Мы рассчитали количество аскорбиновой кислоты, необходимой для высвобождения свободных радикалов в концентрации 0,34 ммоль и активирования дифференциации спящих стволовых клеток.

Новый протокол Маурицио Чеккарелли:

Использование стволовых мезенхимальных клеток в формировании молодых фибробластов

Шаг н.1. 
Проводим дифференцилизацию стволовых клеток кожи в молодые фибробласты. Этот процесс происходит при внутрикожном введением раствора аскорбиновой кислоты (концентрация 0,34 ммоль) в присутствии трёхвалентного железа с последующим высвобождением свободных радикалов. Дифференциация стволовых клеток на фоне такой стимуляции происходит в течение 7-21 дней (количество молодых фибробластов увеличивается на 30%).
(STAMIN C)

Шаг н.2.
Проводим стимуляцю молодых новосформированных фибробластов для их последующей мультипликации (увеличения их количества) и повышение метаболической активности (производство компонентов матрицы кожи), посредством активации рецепторов тирозин-киназы при помощи тромбоцитарных факторов роста, или стимуляцией рецепторов СD44 фрагментами гиалуроновой кислоты. (PRP)

Шаг н.3.
Проводим введение прекурсоров компонентов дермы (аминокислот с бикарбонатным буфером для нормализации рН 7,4) с целью стимуляции фибробластов и дальнейшего формирования нового дермального матрикса. А так же используем аутологичный ибрин для регенерации поверхностных морщин. (SKIN OPTIMIZE)

Предлагаемый протокол позволяет добиться реальных биологических результатов, а с ними и эстетических. Полный курс процедур оптимально проводить два раза в год. Данная методика не исключает применение других классических процедур, таких как введение ботулотоксина, контурной пластики, процедур пилинга и т.д.

Новый протокол Маурицио Чеккарелли:
Использование стволовых мезенхимальных клеток в формировании молодых фибробластов

Протокол для волосяной части головы

Шаг н. 1. 
Готовый расствор STAMIN C ввести папульно по всему периметру интересующей нас поверхности. 

Шаг н. 2. 
По прошествии 21-го дня провести процедуру PRP, используя нижнюю (1/3) часть плазмы особо богатую тромбоцитами. Ввести папульно

Шаг н. 3. 
Через 30 дней провести биостимуляцию аминокислотами (SKIN OPTIMIZE).